张智军课题组
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表面增强拉曼光谱结合胶体金免疫层析分析方法的研究

2017-12-26

   氨基糖苷类(如新霉素等)和喹诺酮类抗生素具有抗菌力强,成本低,抑菌效果显著等优点,而被广泛应用于治疗人类或动物的细菌感染性疾病,但其滥用会导致细菌耐药性逐年上升,且其残留可能会引起机体严重的耳毒性,肾毒性,甚至会抑制软骨的生长,因此,对其进行快速、高灵敏度检测极为必要。目前,对抗生素的测定主要采用色谱分析(如高效液相色谱法,液质联用等)和免疫分析法(如酶联免疫吸附试验,金标检测试纸(LFA)等),但其普遍存在操作繁琐等缺点,其中LFA技术较为简便,但其只能进行定性或半定量检测。

   表面增强拉曼光谱(SERS)技术可检测低至单分子水平的目标物,是目前检测灵敏度最高的分析方法之一。因此,最近本课题组与江南大学/河南农科院张改平院士领导的科研团队密切合作,通过在LFA的硝酸纤维素膜上设置一条检测带(图1),或两条检测带(图2),并结合胶体金的SERS效应,建立了一种新型SERS-LFA方法,实现了对单一及及多种抗生素残留的简便、高灵敏度检测。中科院苏州纳米所与江南大学博士联培生史巧巧是两篇论文的第一作者。

   科研人员首先通过合成具有拉曼信号的金纳米颗粒,并标记单克隆抗体,制备成拉曼免疫探针,进而获得了基于SERS-LFA技术的新霉素拉曼试纸(图1)。通过测试不同新霉素浓度下的拉曼试纸检测线的SERS信号并绘制标准曲线,得出IC50为0.04 ng/mL,检测限为0.216 pg/mL。牛奶样品中添加回收率为89.7%-105.6%,变异系数小于5%,表明该试纸具有很好的准确性和精密度。

   该工作近期在线发表在国际学术期刊 Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy上。

Shi, Q. Q., Huang, J., Sun, Y. N., Yin, M. Q., Hu, M., Hu, X. F. *, Zhang, Z. J. *, Zhang, G. P*. Utilization of a Lateral Flow Colloidal Gold Immunoassay Strip Based on Surface-Enhanced Raman Spectroscopy for Ultrasensitive Detection of Antibiotics in Milk, Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, published online, November 21, 2017,.

图1.(a)拉曼免疫探针制备示意图;(b)新霉素拉曼试纸检测示意图。

   在上述工作基础上,我们进一步设计、制备了可以同时检测新霉素和喹诺酮类抗生素的多联试纸 (图2)。虽然诺氟沙星抗体与依诺沙星,环丙沙星,氧氟沙星,氟罗沙星,马波沙星,恩诺沙星,培氟沙星之间表现出较大的交叉反应,对多种抗生素的同时准确检测不利。本实验设计、制备了新型SERS-LFA试纸,实现了同时检测新霉素和喹诺酮类抗生素。更重要的是,在牛奶样品加标实验中也实现了更快速、便捷、准确地同时监控牛奶中的多种抗生素残留。

   该工作近期被国际学术期刊Microchimica Acta接受发表。

Shi, Q. Q., Huang, J., Sun, Y. N., Deng, R. G., Teng, M., Li. Q. M., Yang, Y. Y., Hu, X. F. *, Zhang, Z. J. *, Zhang, G. P*. A SERS-based multiple immuno-nanoprobe for ultrasensitive detection of neomycin and quinolone antibiotics via a lateral flow assay, Microchimica Acta, 2017, in press.

2.a)新霉素和喹诺酮类的拉曼试纸多联检测示意图;(b)试纸各检测带的反应示意图。

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